ELISA

O ELISA funciona imobilizando um antígeno ou anticorpo específico em uma placa e, em seguida, adicionando a amostra e um anticorpo secundário conjugado a uma enzima. Adiciona-se um substrato que reage com a enzima e produz uma mudança de cor proporcional à quantidade do analito-alvo presente, medida por espectrofotometria. Existem vários formatos: ELISA direto, indireto, sanduíche e competitivo, cada um adequado a diferentes necessidades de detecção.

Clinicamente, o ELISA é classicamente usado como teste de triagem para o HIV devido à sua alta sensibilidade (poucos falsos negativos), embora tenha uma taxa notável de falsos positivos; os resultados positivos são tradicionalmente confirmados por Western blot ou, mais recentemente, por PCR de RNA do HIV ou por um ensaio combinado de antígeno/anticorpo de quarta geração. O ELISA também é usado para detectar anticorpos em doenças autoimunes (p. ex., anti-CCP na artrite reumatoide, anti-dsDNA no lúpus), para medir níveis hormonais (p. ex., beta-hCG em testes de gravidez) e para diagnosticar diversas infecções (p. ex., triagem de doença de Lyme, anticorpos contra Toxoplasma).

Princípio-chave para provas: o equilíbrio entre sensibilidade e especificidade — o ELISA é concebido como uma ferramenta de triagem de alta sensibilidade (minimizando falsos negativos), com possível custo em especificidade, o que torna essencial o teste confirmatório nos resultados positivos de diagnósticos de grande impacto, como o HIV. Compreender a matemática por trás de sensibilidade, especificidade, VPP e VPN no contexto da triagem (baixa prevalência) versus o teste confirmatório (alta probabilidade pré-teste) é cobrado com muita frequência no Step 1 e no Step 2.