coloração de Gram

O procedimento da coloração de Gram envolve quatro etapas: (1) corante primário cristal violeta, (2) lugol (iodo de Gram) como mordente para fixar o corante, (3) descoloração com álcool/acetona e (4) contracoloração com safranina. As bactérias Gram-positivas têm uma espessa camada de peptideoglicano que retém o complexo cristal violeta-iodo, resistindo à descoloração e mantendo a cor roxa. As bactérias Gram-negativas têm uma fina camada de peptideoglicano e uma membrana externa contendo lipopolissacarídeo (LPS) que é rompida pelo álcool, permitindo que o cristal violeta seja removido; elas então captam a contracoloração com safranina, aparecendo rosa/vermelhas. A morfologia bacteriana (cocos, bacilos, espiroquetas) e o arranjo (cadeias, cachos, pares) também são avaliados. Importância clínica: os resultados da coloração de Gram orientam a escolha empírica do antibiótico antes de os resultados da cultura estarem disponíveis (p. ex., vancomicina para cocos Gram-positivos em cachos, sugestivos de Staphylococcus, vs. cobertura mais ampla para bacilos Gram-negativos). Alguns organismos não são bem visualizados pela coloração de Gram, incluindo Mycobacteria (álcool-ácido resistentes, exigem a coloração de Ziehl-Neelsen), Mycoplasma (não tem parede celular), Legionella, Chlamydia, Treponema (muito fino, exige microscopia de campo escuro) e fungos (exigem preparação com KOH ou outras colorações). Associações comuns em provas: cocos Gram-positivos em cachos = Staphylococcus; em cadeias = Streptococcus; diplococos Gram-negativos = Neisseria; bacilos Gram-negativos = Enterobacteriaceae, Pseudomonas. A coloração de Gram costuma ser o primeiro exame realizado em amostras de LCR, escarro, sangue ou feridas na suspeita de infecção bacteriana.