enolase

**Bioquímica** - Reação: 2-fosfoglicerato → fosfoenolpiruvato (PEP) + H2O. É uma reação reversível de liase (desidratase) na glicólise e na gliconeogênese. - É a penúltima etapa da glicólise. A piruvato-quinase catalisa a etapa seguinte, PEP → piruvato, que gera ATP por fosforilação em nível de substrato. - Etapa anterior: a fosfoglicerato-mutase converte 3-fosfoglicerato em 2-fosfoglicerato. - A reação requer Mg2+ como cofator. A desidratação cria um fosfato de enol de alta energia, de modo que o PEP tem potencial de transferência de fosforila muito alto. - A enolase não é uma etapa regulatória importante. Opera próximo ao equilíbrio e é reversível, por isso também atua na gliconeogênese.

**Inibição** - O fluoreto inibe a enolase ao formar um complexo com Mg2+ e fosfato no sítio ativo. - Pérola clínica: os tubos de coleta de sangue de tampa cinza contêm fluoreto de sódio (frequentemente com oxalato de potássio). O fluoreto bloqueia a glicólise em hemácias, leucócitos e plaquetas, o que evita leituras falsamente baixas de glicose em amostras de sangue armazenadas. - Sem fluoreto, a glicólise continua no tubo e reduz a glicose medida. - Como a enolase é inibida, 2-fosfoglicerato e 3-fosfoglicerato se acumulam, e há menor produção de ATP pelas etapas seguintes.

**Isoenzimas e significado clínico** - Isoformas: alfa (ubíqua), beta (músculo) e gama (neurônios e células neuroendócrinas). - A enolase neurônio-específica (NSE) é a forma gama-gama. É um marcador tumoral para: - Carcinoma pulmonar de pequenas células (origem neuroendócrina), usada para monitorar a resposta ao tratamento e a recidiva. - Neuroblastoma, que também é acompanhado por HVA/VMA urinários. - Outros tumores neuroendócrinos, como carcinoide e carcinoma medular de tireoide (menos específica). - A NSE também é um marcador prognóstico após parada cardíaca. Níveis séricos persistentemente elevados em 48–72 horas sugerem lesão cerebral hipóxico-isquêmica grave e mau desfecho neurológico. - A hemólise eleva falsamente a NSE, pois as hemácias contêm enolase. - A alfa-enolase pode ser um receptor de plasminogênio na superfície de algumas células. Anticorpos anti-alfa-enolase foram descritos em condições autoimunes (p. ex., encefalopatia de Hashimoto, AR e algumas vasculites), mas isso é de baixo rendimento. - A enolase é uma proteína associada à virulência em vários micro-organismos, nos quais pode se ligar ao plasminogênio. Isso é de baixo rendimento.

**Revisão rápida das enzimas da glicólise (alto rendimento)** - Etapas irreversíveis/reguladas: hexoquinase/glicoquinase, PFK-1 (limitante da velocidade) e piruvato-quinase. - Etapas de fosforilação em nível de substrato: fosfoglicerato-quinase (1,3-BPG → 3-PG) e piruvato-quinase (PEP → piruvato). - A enolase está na fase de pagamento (de lucro), entre a fosfoglicerato-mutase e a piruvato-quinase.

**Deficiência** - A deficiência de enolase é extremamente rara. A deficiência de beta-enolase (muscular) pode causar intolerância ao exercício. Os defeitos de enzimas glicolíticas que causam anemia hemolítica são mais comumente a deficiência de piruvato-quinase (a de alto rendimento), seguida de hexoquinase e outras.

**Pérolas para a prova** - Enolase = desidratação, 2-PG → PEP, inibida pelo fluoreto. - NSE: marcador do carcinoma pulmonar de pequenas células e do neuroblastoma. - O tubo de tampa cinza (NaF) é usado para dosagem de glicose e lactato.