mutação no sítio de splicing

**Contexto do splicing normal:** Os íntrons do pré-mRNA são removidos pelo spliceossomo (snRNPs: U1, U2, U4, U5, U6), que reconhece: (1) o sítio de splicing 5' (doador), com GU conservado no início do íntron; (2) o sítio de splicing 3' (aceptor), com AG conservado no final do íntron; (3) a adenina (A) do ponto de ramificação, localizada a montante do sítio 3', com um trato de polipirimidinas. Mecanismo: a A do ponto de ramificação ataca o GU 5', formando um intermediário em laço (lariat); a extremidade 3' do éxon a montante então se une ao éxon a jusante. Os íntrons são removidos, e os éxons são ligados. Os anticorpos anti-Smith (anti-snRNP) e anti-U1 RNP têm como alvo componentes do spliceossomo (LES, doença mista do tecido conjuntivo).

**Fisiopatologia das mutações:** Mutações pontuais, pequenas deleções ou inserções nos dinucleotídeos invariantes GU/AG, no ponto de ramificação ou nos potencializadores (enhancers) e silenciadores de splicing exônicos/intrônicos podem causar: - Salto de éxon (o desfecho mais comum) - Retenção de íntron - Ativação de um sítio de splicing críptico (dentro de um éxon ou de um íntron), o que causa perda parcial do éxon ou inclusão parcial do íntron - Mudança no quadro de leitura (frameshift) e/ou códon de parada prematuro, que pode desencadear a degradação do mRNA mediada por mutações sem sentido (NMD) e levar à perda de função - Deleções ou inserções em quadro (in-frame), que podem originar uma proteína truncada ou disfuncional

Como as mutações podem ser silenciosas no nível da proteína e ainda assim afetar o splicing, uma mutação exônica sinônima ou "silenciosa" próxima a uma junção de splicing ainda pode ser patogênica.

**Associações clínicas (alto rendimento):** - **Beta-talassemia:** o exemplo clássico de prova. As mutações no sítio de splicing do gene da β-globina causam β0 (ausência de proteína, p. ex., mutações no consenso GT/AG) ou β+ (proteína reduzida, p. ex., ativação de sítio de splicing críptico no íntron 1 ou 2). Isso leva à síntese diminuída de cadeias β, excesso de cadeias α que precipitam nas hemácias, eritropoese ineficaz, anemia microcítica hipocrômica, células em alvo e elevação de HbA2 e HbF. Lembre que as mutações da "β-tal" costumam estar em promotores ou sítios de splicing. - **Distrofia muscular de Duchenne/Becker (distrofina):** mutações de splicing podem romper o quadro de leitura (Duchenne) ou preservá-lo (Becker). Oligonucleotídeos antisenso de salto de éxon (eteplirsena, golodirsena) restauram o quadro de leitura e conferem um fenótipo mais leve, semelhante ao de Becker. - **Atrofia muscular espinhal:** o SMN2 tem uma troca C→T no éxon 7 que causa o salto do éxon 7, de modo que a maior parte da proteína SMN2 é não funcional. Nusinersena (um oligonucleotídeo antisenso) e risdiplam (um modificador de splicing oral) promovem a inclusão do éxon 7. - **Fibrose cística (CFTR):** algumas mutações de splicing (p. ex., 3849+10kb C→T) causam doença mais leve. - **Outras:** Tay-Sachs (HEXA, p. ex., em judeus asquenazes, uma inserção de 4 pb mais uma mutação de splicing), disautonomia familiar (mutação no íntron 20 de IKBKAP/ELP1 causando salto do éxon 20), neurofibromatose tipo 1, BRCA1/BRCA2 (câncer de mama e ovário hereditário), síndrome de Marfan e outras.

**Distinções-chave para provas:** - As mutações no sítio de splicing são um subtipo de mutação pontual, mas seu efeito sobre a proteína é variável e tipicamente mais grave do que o de uma mutação missense. - Não são o mesmo que uma mutação nonsense, que muda diretamente um códon para um códon de parada, embora as mutações de splicing possam gerar indiretamente uma parada prematura por frameshift. - Detectá-las exige análise de mRNA/cDNA ou software de predição de splicing, pois o sequenciamento apenas de éxons pode deixar passar variantes intrônicas profundas. - Como os íntrons não são traduzidos, mutações no interior profundo de um íntron costumam ser benignas, mas mutações nas sequências conservadas de splicing são patogênicas.

**Enfoque terapêutico:** Oligonucleotídeos antisenso (nusinersena, eteplirsena) e modificadores de splicing de moléculas pequenas (risdiplam) podem corrigir ou modular o splicing, demonstrando a importância clínica desse mecanismo.