gram-positivo

**Mecanismo da coloração de Gram:** As etapas são cristal violeta (corante primário), lugol de Gram (mordente, forma um complexo cristal violeta–iodo), descolorante com álcool ou acetona e, por fim, safranina (contracorante). As células gram-positivas têm uma parede espessa de peptidoglicano em múltiplas camadas, que se desidrata e retém o complexo durante a descoloração, de modo que permanecem roxas. As células gram-negativas têm uma camada fina de peptidoglicano e uma membrana externa. O descolorante dissolve a membrana externa e remove o complexo, de modo que elas captam a safranina e aparecem em rosa/vermelho.

**Características do envelope celular (gram-positivas):** - Camada espessa de peptidoglicano (cerca de 20–80 nm). - Sem membrana externa, portanto sem LPS/endotoxina. O choque séptico mediado pelo lipídio A é, portanto, uma característica das gram-negativas. - Ácidos teicoicos e ácidos lipoteicoicos (LTA) estão inseridos na parede. O LTA se ancora na membrana citoplasmática e pode ativar o TLR-2 e a liberação de citocinas. - Espaço periplasmático estreito. - As exotoxinas são os principais fatores de virulência (por exemplo, toxina diftérica, toxina tetânica, toxina botulínica, TSST-1 e toxina alfa).

**Importância clínica:** - A parede celular é o alvo dos betalactâmicos, da vancomicina e da bacitracina. Os organismos gram-positivos geralmente são mais suscetíveis à penicilina e à vancomicina porque não há barreira de membrana externa. A vancomicina não cobre gram-negativos porque é grande demais para atravessar a membrana externa. - A lisozima degrada o peptidoglicano e é especialmente eficaz contra gram-positivos.

**Classificação (algoritmo de alto rendimento):** - **Cocos** - Agrupados em cachos, catalase +: *Staphylococcus*. Coagulase + é *S. aureus*. Coagulase − é *S. epidermidis* (sensível à novobiocina) ou *S. saprophyticus* (resistente à novobiocina). - Em cadeias/pares, catalase −: - *Streptococcus*, que pode ser alfa-hemolítico (*S. pneumoniae*: sensível à optoquina, solúvel em bile; viridans: resistente à optoquina), beta-hemolítico (grupo A *S. pyogenes*: sensível à bacitracina; grupo B *S. agalactiae*: resistente à bacitracina, CAMP +, hipurato +) ou gama-hemolítico (não hemolítico). - *Enterococcus* (bile-esculina +, cresce em NaCl a 6,5%). *Enterococcus* e *Streptococcus bovis/gallolyticus* do grupo D são ambos do grupo D. *S. gallolyticus* está associado ao câncer de cólon. - **Bacilos** - Formadores de esporos: *Bacillus* (aeróbios: *anthracis*, *cereus*) e *Clostridium* (anaeróbios: *tetani*, *botulinum*, *perfringens*, *difficile*). - Não formadores de esporos: *Corynebacterium diphtheriae* (bacilos em forma de letras chinesas/clava, grânulos metacromáticos; teste de Elek; toxina via β-profago), *Listeria monocytogenes* (motilidade em tombo, intracelular facultativa, cresce em baixas temperaturas, laticínios não pasteurizados; meningite neonatal). - Filamentosos/ramificados: *Actinomyces* (anaeróbio, não álcool-ácido resistente, grânulos de enxofre) e *Nocardia* (aeróbia, fracamente álcool-ácido resistente).

**Ressalvas e exceções:** - Alguns organismos coram mal ou não são visualizados pela coloração de Gram: *Mycobacteria* (álcool-ácido resistentes; têm uma camada cerosa de ácido micólico), *Mycoplasma* (sem parede celular), *Chlamydia* (intracelular obrigatória), *Rickettsia*, *Treponema*, *Legionella* (coram mal; usar coloração pela prata) e *Borrelia*. Apenas alguns destes são gram-negativos. - Culturas antigas de bactérias gram-positivas (especialmente *Clostridium*, *Bacillus*) podem corar-se como gram-variáveis ou gram-negativas à medida que a parede se degrada. - A descoloração excessiva pode fazer as gram-positivas parecerem gram-negativas.

**Pontos-chave para a prova:** - Doenças gram-positivas mediadas por exotoxinas: síndrome do choque tóxico, síndrome da pele escaldada, difteria, tétano, botulismo, antraz e colite pseudomembranosa. - Cocos gram-positivos em cachos em hemocultura sugerem *Staph* (procurar uso de drogas intravenosas, endocardite ou osteomielite). Tratar empiricamente com vancomicina se houver preocupação com MRSA (o MRSA tem PBP2a alterada, codificada por *mecA*). - O ácido teicoico e a proteína A (*S. aureus*) ligam-se à região Fc da IgG e inibem a opsonização. - A proteína M (*S. pyogenes*) é antifagocítica, e o mimetismo molecular está na base da febre reumática.